标记基因和目的基因的区别? 标记基因

基因工程运载体为什么需要标记基因?标记基因的功能是为了方便我们更容易挑选被转化的个体。虽然直接检测转化子产物确定转化子从理论上来说可以,但是其数量之多工作量之大成本之高,决定了不可能采取这一方式进行转化个体筛选。举个例子,在载体构建或农杆菌转化植株时,一次转化就能得到成百上千个菌落/愈伤,如果要按照“筛选细胞产物”,那么得检测每个菌落/愈伤的表达情况,也就意味着上千次PCR/HPLC/WB操作;而采用抗性培养基,长出来的菌落/愈伤基本就是转化子,其节省的成本和工作量是极大的。现在的发展方向是采用表达无害产物的筛选基因(如显色或营养缺陷),或采用同源重组的方式在挑选好的转化子中去除标记基因。这样能进一步克服使用抗生素抗性筛选基因带来的抗生素抗性风险的缺陷。
希望采纳
标记基因的作用是如何体现的标记基因一般是指协助完成目的基因的检测与鉴定的基因，一般情况下是在载体上必要基因
体现：通过表达编码出荧光蛋白（就是会发光的蛋白，这种蛋白可以观察的），或者编码出抗生素抗性物质（即是可以抵抗抗生素侵扰的物质）来证明，这种基因是存在的
补充1：观察到该种基因编码的荧光蛋白=有这种基因=有目的基因
【标记基因和目的基因的区别? 标记基因】补充2：可以在该种抗生素的培养基生存=这种抗性基因=有目的基因

文章插图
标记基因这个问题其实涉及到了双筛选的问题。以最简单的大肠杆菌T克隆为例，T克隆中常用的T载体上带有一个青霉素抗性基因，然后还有一个β－半乳糖苷酶N端141个氨基酸的编码基因（LacZ'），而我们常用的大肠杆菌表达系统中所使用的工程菌，它们的基因组里面本身含有β－半乳糖苷酶C端其他氨基酸序列的编码序列。但无论是质粒载体上的N端片段也好还是基因组本生的C端片段也好，单独存在的时候都没有任何活性。只有这两者都存在的时候，才会互补形成有活性的β－半乳糖苷酶。而这个酶可以分解一种叫做X－gal的乳糖类似物，使得菌落形成蓝色。在载体上的这部分lacZ'编码序列前端插入一个小片段是不会影响到它的互补活性的，所以多克隆位点的碱基序列就被插在了这里。但如果在这之间插入一个大片段，那么这就会导致lacZ'失活。所以，我们在完成质粒重组后，将这些质粒转入大肠杆菌，然后在含有青霉素的培养基中加入X－gal和lacZ'表达诱导物IPTG，如果是质粒自连接的话，那么就会产生有完整活性的β－半乳糖苷酶，最后形成蓝色菌落。而对于插入成功的重组质粒，那么就不会产生有活性的β－半乳糖苷酶，最后形成的是正常的白色菌落。这就是最经典的α互补，也叫做蓝白筛选，现在大肠杆菌表达系统的重组子筛选所用的原理，基本上还是这个。但这个方法并不能百分百保证是正确插入片段，还要有下游操作进一步验证。比如酶切鉴定和PCR鉴定。
简单来说质粒上除了抗性基因还有一个基因，抗性基因证明质粒是否转进去。另外一个基因证明片段有没有插进去。插进去的片段都是位于这个基因编码序列内部，如果插进去了，这个基因就失活了，没插进去就有活性。这个有活性的基因能够降解X－gal这种物质使菌落变成蓝色，如果没有活性就不能。
楼下说的其实意思就是用两种内切酶分别切质粒和目的片段，使它们末端带有不同的粘性末端，这样质粒就很难发生自连了。加上重组筛选和后面的下游鉴定，基本上就没有任何问题了。
标记基因怎么筛选目的基因标记基因可以是特有的抗性基因，成功导入并表达该标记基因的生物就具有相应的抗性，据此判断基因表达载体是否成功导入细胞内，此外，标记基因也可以是用放射性同位素标记的基因，通过检测放射性来判断基因表达载体是否成功导入受体细胞。
在基因表达载体中，由于构建载体的目的不同，需要的标记基因也不同。有的标记基因是质粒固有的，有的标记基因是另外加上的。一般情况下，质粒载体在基因组中有1~2个筛选标记，为寄主提供于检测的表型特征。
报告基因和标记基因的区别是什么据我了解的一个重要区别是报告基因的表达水平必须能够对某种条件作出不同反应，才能够给出此种参数是阴性是阳性是增加还是减少的答案。而标记基因只要持续稳定地表达，使得带有它的细胞被标记为此基因阳性即可。
使用报告基因时，往往也需要标记基因，否则无法有效地区分真正的阴性与未成功转染细胞所呈现的假阴性。

标记基因和目的基因的区别? 标记基因

秒懂生活扩展阅读