引物二聚体是什么引物二聚体

如何减少和避免引物二聚体1从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法;
2.可能模板有问题;模板浓度过小，适当加大模板量;
3.Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度;
4.取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的;理由:引物可能会发生发夹结构,自身环化等结构,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟可使引物变为单链，以减少二聚体。不过有人认为在 PCR仪上95度变性5min也同样达到目的，而且成功试过通过延长退火时间也可以消除引物二聚体。
5.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性;
6.PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。
7.增加循环数;
8.降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度(根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些);
9.若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在20-25mmol/l没有区别，则考虑 Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。
10.以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100-1000倍，如果间隔较长可以稀释50-100倍;

文章插图
在做PCR时，出现引物二聚体一.引物设计和样品使用均是一样的情况，就是反应条件的问题
二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器，操作都一样的话，仪器设定上出问题的可能性会大一些，其中退货温度是比较关键的
三.人品问题也会导致这样的情况
四.一般减少引物二聚体的方法：
1.
从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法；
【引物二聚体是什么引物二聚体】2.
可能模板有问题；
3.
模板浓度过小，适当加大模板量；
4.
Taq酶，引物，
Mg2
+浓度可能过高，可降低它们的浓度；
5.
取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；
6.
所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；
7.
PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体；
8.
增加循环数；
9.
降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
10.
若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在
20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对；
11.
以上次的PCR产物作模板二次PCR，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍。
怎样消除引物二聚体首先在设计引物的时候,要注意避免产生引物二聚体.现在的引物设计软件都会有一个dimer的选项,可以看出你设计的引物是否会发生二聚体.如果会形成二聚体,并且序列不能有大的变动,那就注意一下在3'端别发生dimer的互补.
其次,在PCR时提高退火温度可以提高PCR的特异性,可以减少引物二聚体.

引物二聚体是什么 引物二聚体

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